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021-54845833/15800441009
肌酐含量(肌氨酸氧化酶法)檢測試劑盒96樣
測定意義
肌酐(Creatinine，CRE)是肌肉代謝的產(chǎn)物，主要通過腎小球濾過排出體外。在正常情況下，體內(nèi)肌酐的含量基本穩(wěn)定。血液中的肌酐濃度可作為檢測腎小球濾過功能的指標之一。
測定原理
肌酐酶特異作用于肌酐生成肌酸，肌酸在肌酸酶和肌氨酸氧化酶的相繼作用下生成過氧化氫，過氧化氫與顯色劑反應(yīng)呈現(xiàn)紫色，該有色物質(zhì)在546nm有最大吸收峰，進而計算得到肌酐含量。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。
測定步驟
測定步驟
1、分光光度計或酶標儀預(yù)熱30min以上，設(shè)置溫度再37℃，調(diào)節(jié)波長至546nm。
2、在EP管中加入下列試劑：
注意
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試劑(μL) |
測定管 |
空白管(只做一管) |
標準管(只做一管) |
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樣本 |
6 |
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蒸餾水 |
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6 |
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標準品 |
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6 |
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試劑一 |
180 |
180 |
180 |
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混勻，37℃孵育5min后于546nm處讀取吸光值A(chǔ)1 |
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試劑二 |
60 |
60 |
60 |
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混勻，37℃孵育15min后于546nm處讀取吸光值A(chǔ)2ΔA=A2-A1 |
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注意
1.如果ΔA大于0.8，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
如果ΔA的值小于0.01，可增加樣本加樣體積V1(如由6μL增至20μL，則試劑二相應(yīng)減少，空白管和標準管變化同測定管)，或增加樣本取樣質(zhì)量W；則改變后的V1和W需帶入公式重新計算。
預(yù)實驗的意義
預(yù)實驗的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導實驗樣本稀釋比例。
