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α-淀粉酶抑制篩選檢測(cè)試劑盒
測(cè)定意義
測(cè)定原理
需自備的儀器和用品
測(cè)定意義
淀粉水解酶，包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。α-AL (EC 3.2.1.1)隨機(jī)催化淀粉中α-1,4-糖苷鍵水解，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖，同時(shí)使淀粉的粘度降低，因此又稱(chēng)為液化酶。是人體內(nèi)負(fù)責(zé)將淀粉分解為糖的關(guān)鍵消化酶，因此開(kāi)發(fā)α-淀粉酶抑制劑在治療糖尿病相關(guān)研究、天然產(chǎn)物開(kāi)發(fā)、藥物發(fā)現(xiàn)和基礎(chǔ)酶學(xué)研究領(lǐng)域扮演著至關(guān)重要的角色。
測(cè)定原理
α-淀粉酶催化底物反應(yīng)生成有色產(chǎn)物，其在405 nm 處吸光度上升，加入抑制劑后會(huì)抑制α-淀粉酶酶活，吸光度上升的速率會(huì)降低，根據(jù)吸光度差值可計(jì)算出抑制率。
需自備的儀器和用品
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑清單
注意
|
試劑名稱(chēng) |
規(guī)格 |
數(shù)目 |
貯藏 |
備注 |
|
試劑一 |
液體70mL |
x1 |
4℃ |
|
|
試劑二 |
粉劑 |
x1 |
-20℃ |
臨用前加入3mL試劑一混勻 |
|
試劑三 |
液體1mL |
x1 |
-20℃,避光 |
5mmol/L測(cè)定抑制率可作為參考 IC50約為250μmol/L |
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試劑四 |
粉劑 |
x1 |
-20℃,避光 |
臨用前加5ml水溶解，避免反復(fù)凍融 |
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶(hù)的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
